RNA干扰技术抑制内源性绿色荧光蛋白的表达

作者：陈维贤; 黄爱龙; 闫歌; 唐霓; 张娟; 陈娟

来源：生物技术通报, 2005, (06): 65-68+87.

DOI：10.3969/j.issn.1002-5464.2005.06.015

• RNA干扰
• 绿色荧光蛋白
• 短发夹状RNA

目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞株;构建短发夹RNA(shRNA)表达质粒并观察其对内源性GFP的抑制作用。方法转染pEGFP-N1至HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定表达GFP的细胞株(HepG2.GFP);设计合成针对GFP基因的siRNA对应的DNA片段,插入转录载体pTZU6+1,构建shRNA表达载体pSHGFP,转染HepG2.GFP,荧光显微镜观察细胞荧光强度,以western blot检测GFP蛋白水平,以RT-PCR检测mRNA水平。结果利用PCR方法从HepG2.GFP细胞基因组DNA中检测到GFP基因;pSHGFP能够显著抑制该细胞中GFP的表达。结论GFP基因成功整合至HepG2细胞基因组中,pSHGFP能够显著抑制内源性GFP的表达,该系统能够用于RNA干扰机制等研究中。

• 单位
  重庆医科大学