登革病毒1型E蛋白的原核细胞表达及多克隆抗体的制备

作者：汪伟; 丁显平; 杨会强; 李竹石; 谭帅; 赵宇; 刘莉娜; 谭昌耀; 曾献武

来源：国际检验医学杂志, 2013, 34(23): 3107-3109.

DOI：10.3969/j.issn.1673-4130.2013.23.002

• 登革病毒
• 原核细胞
• 抗体
• 多克隆
• 遗传载体 dengue virus
• prokaryotic cells
• antibodies
• polyclonal
• genetic vectors

目的构建登革病毒1型(DENV-1)E蛋白的原核细胞表达载体并进行原核细胞表达,并制备其多克隆抗体。方法利用聚合酶链反应(PCR)扩增DENV-1E蛋白序列,经酶切后将其插入原核细胞表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-D1-E。重组质粒转化E.Coli Rosetta(DE3)感受态细胞,目的蛋白经异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达情况,并用纯化后的表达蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗血清,用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性。...

• 单位
  成都生物制品研究所有限责任公司; 四川大学; 生命科学学院