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摘要
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白A104R(rA104R)及研制抗rA104R的多克隆抗体，本研究通过ExPASy等在线生物信息学软件初步预测该蛋白的理化性质、信号肽、核定位信号等信息，继而合成ASFV的A104R基因，构建基于pET-28a(+)载体的原核表达系统。重组蛋白用Ni亲和层析纯化后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术鉴定。纯化的蛋白免疫6～8周龄BALB/c小鼠，制备抗rA104R的多克隆抗体，通过Western blotting和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其反应性和免疫原性。结果显示，原核表达载体构建成功；重组菌在37℃诱导8 h后表达量最高，在包涵体和上清中均有表达，表明其呈部分可溶性表达；纯化的重组蛋白大小约16 kDa,且反应性良好；LC-MS分析结果显示，该rA104R蛋白多个肽段均与目标蛋白的氨基酸序列相匹配，匹配率为59%;制备的鼠源抗rA104R多克隆抗体效价大于1∶2 048 000,具有良好的免疫原性。结果表明，本研究制备的rA104R及其多克隆抗体可进一步用于生物学功能研究，并可为疫苗及相关诊断试剂研制提供基础材料。
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