猪嵴病毒VP0基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

作者:韩磊; 彭志豪; 刘莹; 顾文源; 王丙雷; 郭禹; 左玉柱*; 范京惠*
来源:中国动物传染病学报, 2023, 31(01): 72-77.
DOI:10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.2023.01.007

摘要

本研究旨在建立一种检测猪嵴病毒(PKV)抗体的间接ELISA检测方法。通过原核表达系统表达PKV VP0基因作为包被抗原,并通过Western blot鉴定证明重组蛋白与PKV阳性血清能发生良好的特异性反应。优化反应条件,得出PKV VP0间接ELISA检测方法最适反应条件是抗原包被浓度为0.62μg/mL,血清稀释浓度为1∶200,最佳酶标二抗稀释浓度1∶5000,使用5%脱脂奶粉作为封闭液37℃孵育1 h,显色10 min,当检测样品OD450<0.225判定血清样品抗体为阴性,OD450≥0.225判定血清样品抗体为阳性,且特异性高、重复性好,与Western blot符合率达到95.6%。PKV VP0蛋白间接ELISA方法的建立,作为一种操作简单,灵敏度高,特异性高,重复性好的血清学检测方法,为PKV的监测和预防提供了技术支持。