牛METTL3真核表达载体的构建及生物信息学分析

作者：黄雯静; 赵尚琪; 吴陈华; 高丽; 付金蕾; 刘思雨; 赵童; 陈楠楠; 岳山; 张泽财; 刘宇; 周玉龙; 朱战波^*

来源：生物技术, 2021, 31(06): 527-533.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.06.0081

• 牛METTL3基因
• 真核表达载体
• 生物信息学
• 分析和预测

[目的]对牛甲基转移酶METTL3基因进行真核表达并对其蛋白进行生物信息学分析。[方法]以MDBK细胞为模板，RT-PCR扩增牛METTL3基因片段，构建pcDNA3.0-METTL3载体并转染至293T细胞后，进行Western Blotting验证，通过生物信息学在线工具分析METTL3蛋白。[结果]PCR、双酶切鉴定、Western Blotting和生物信息学分析表明牛METTL3基因编码区序列全长为1 760 bp,编码了580个氨基酸，蛋白的分子质量64.4469 kDa, PI为5.98,属于不稳定亲水性蛋白，不存在跨膜结构与信号肽。二级结构主要是由α螺旋和无规则卷曲构成，三级结构与二级结构预测结果一致。[结论]成功构建了pcDNA3.0-HA-METTL3真核表达载体，生物信息学分析表明，牛METTL3蛋白为在细胞质中分泌合成的可溶蛋白，α螺旋和无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件。

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学