带J链的α-防御素-1基因转染COS-7细胞后的表达检测

作者：刘贤华; 白晓东; 仝青英; 张韶峰

来源：中国危重病急救医学, 2006, 18(02): 71-73.

DOI：10.3760/j.issn:1003-0603.2006.02.003

• 重组聚合酶链反应
• 杀菌肽
• J链
• α-防御素-1
• 转染

目的将α防御素1(HNP 1)基因与J链基因重组为一种新的杀菌肽分子J HNP 1,观察J HNP 1在细胞内的表达及分泌情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法分别从pCH J质粒和pB abeN eo HNP 1质粒中扩增出J链和HNP 1;进行重组PCR,获取J HNP 1 DNA片段,并插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA 3.1()/M yc H isC中;用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入CO S 7细胞,然后应用蛋白质免疫印迹法(W estern b lot)检测H is tag标签基因。结果用抗H is抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在约24 ku处均有强反应条带显示,其大小与预测相符;对照组未见相应条带显示。结论采用W estern b lot检测到新的杀菌肽分子J HNP 1在细胞内得到表达并分泌到细胞外,为进一步研究J HNP 1杀菌肽的抗菌活性奠定了基础。

• 单位
  中国人民武装警察部队总医院