基于VEGF/PI3K/Akt/eNOS信号通路探讨木犀草素干预A型流感病毒的作用机制

作者：黄家望; 王康宇; 马心悦; 刘卓琳; 冯芷莹; 尹抗抗^*; 李玲^*

来源：湖南中医药大学学报, 2023, 43(09): 1584-1590.

• 木犀草素
• A型流感病毒
• 作用机制
• VEGF/PI3K/Akt/eNOS信号通路

目的 探讨木犀草素对A型流感病毒（influenza A virus, IAV）感染的小鼠肺上皮细胞损伤模型的作用机制。方法 将小鼠肺上皮MLE-12细胞分为正常组、模型组、奥司他韦组、高剂量组和低剂量组，除正常组外，其余4组均使用IAV感染，正常组加入等量病毒稀释液；2 h后弃病毒工作液，正常组和模型组加入病毒维持液，药物组加入用病毒维持液稀释的药物工作液，干预8 h后收集细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况；ELISA实验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的表达；免疫荧光检测细胞内血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）蛋白表达情况；RT-qPCR技术检测细胞内VEGF、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)、3-磷酸肌醇激酶（phosphoinositide 3-kinase, PI3K）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS） mRNA表达情况；Western blot法检测细胞内VEGF、Akt、PI3K和eNOS蛋白表达情况。结果 CCK-8结果显示，不同浓度的木犀草素均能降低IAV感染所致的细胞损伤（P<0.01），其EC50值为7.204μmol/L，因此，将后续实验中的木犀草素药物浓度定为5μmol/L和2.5μmol/L。与正常组相比，模型组细胞上清液中TNF-α和IL-6升高（P<0.01），细胞内VEGF的荧光蛋白强度增强（P<0.01），细胞内VEGF、Akt、PI3K和eNOS的mRNA和蛋白的表达升高（P<0.01）；与模型组相比，高剂量组和低剂量组细胞上清液中TNF-α和IL-6降低（P<0.01），细胞内VEGF的荧光蛋白强度减弱（P<0.01），细胞内VEGF、Akt、PI3K和e NOS的mRNA和蛋白的表达降低（P<0.01）。结论 木犀草素能抑制炎性细胞因子的分泌，缓解IAV感染所致的细胞损伤，其过程可能与VEGF/PI3K/Akt/eNOS信号通路密切相关。

• 单位
  湖南中医药大学