乌头碱调控miR-181d-5p/DDX3轴对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响

作者：赵丹丹; 张素娥; 苗立业; 王岩

来源：天津医药, 2023, 51(09): 922-928.

• 乌头碱
• 微小RNA-181d-5p
• DEAD-box RNA解旋酶3
• 宫颈癌HeLa细胞

目的 探讨乌头碱通过调控微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)/DEAD-box RNA解旋酶3(DDX3)轴对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响。方法 使用不同剂量乌头碱处理宫颈癌HeLa细胞，四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖确定给药剂量。将HeLa细胞分为对照组（正常培养，不进行处理），乌头碱低剂量组（4 mg/L）、中剂量组（8 mg/L）、高剂量组（16 mg/L），顺铂组（5 mg/L），乌头碱高剂量+miR-NC组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p siRNA阴性对照（miR-NC）质粒]及乌头碱高剂量+miR-181d-5p低表达组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。平板克隆形成实验及流式细胞仪分别检测各组HeLa细胞克隆形成数与凋亡情况；实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中miR-181d-5p和DDX3 mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法检测HeLa细胞中DDX3、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平；双萤光素酶报告基因实验验证miR-181d-5p与DDX3的靶向关系。结果 以0.5～64 mg/L的乌头碱分别处理HeLa细胞24 h、48 h、72 h后，对HeLa细胞均有不同程度的抑制作用，选择剂量为4 mg/L、8 mg/L、16 mg/L的乌头碱用于后续实验。与对照组比较，乌头碱低、中、高剂量组及顺铂组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平依次降低（P<0.05），凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平依次升高（P<0.05）；与乌头碱高剂量组和乌头碱高剂量+miR-NC组比较，乌头碱高剂量+miR-181d-5p低表达组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.05），凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低（P<0.05）；双萤光素酶报告基因检测证实miR-181d-5p与DDX3存在靶向关系。结论 乌头碱可调控miR-181d-5p/DDX3轴，促进miR-181d-5p表达，抑制DDX3表达，进而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，促进细胞凋亡。

• 单位
  石家庄市第四医院