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摘要
目的：建立从少量原代培养滑膜细胞中同时提取微量总RNA和总蛋白质的方法。方法：向5×105原代成纤维样滑膜细胞（FLS）中加入0.3 ml的TRIzol~(TM)试剂经过改良抽提总RNA；同时将抽提总RNA剩下的中下两相，用异丙醇-盐酸胍-无水乙醇抽提蛋白质。另外将FLS细胞标本分别采用经典的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法（AGPC）和分子克隆实验手册介绍的十二烷基硫酸钠（SDS）-裂解法抽提总RNA和蛋白质作为对照。检测所提总RNA和蛋白质的纯度、完整性和生物学行为功能。结果：AGPC和TRIzol~(TM)试剂提取的总RNA的18 S带和28 S带清晰可见，且28 S带比18 S带亮度强2～3倍，带与带之间无拖尾现象，A_(260)/A_(280)值均在1.8以上，含量18.5μg以上。检测两种方法所提总RNA的IL-1β和TNF-α mRNA表达，显示丰度高且两种方法的差异不明显。用总RNA抽提剩下的中下两相提取的蛋白质，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测，蛋白质分离效果好，无杂质和蛋白降解，A_(280)/A_(260)值均在1.8以上，含量80μg以上。免疫印迹法对白介素-1β和肿瘤坏死因子-α蛋白质分析，均可见一条清晰的特异带，与常规SDS裂解液提取的蛋白质结果相同。结论：本研究建立了从FLS原代细胞中同时提取微量总RNA和总蛋白质的方法，得率高，纯度好，具有化学完整性和生物反应能力。
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