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摘要
目的探讨NEMO结合域肽(NBDP)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺组织炎症和细胞凋亡的影响及其机制。方法采用随机数字表法将36只雄性BALB/c小鼠分为生理盐水(NS)对照组、ARDS模型组、NBDP阴性对照组及6、12、18 μg NBDP预处理组, 每组6只。雾化吸入脂多糖(LPS)50 μL制备ARDS小鼠模型;NS对照组吸入等量NS。在雾化吸入LPS前30 min, NBDP阴性对照组吸入非功能性NBDP类似物;NBDP预处理组分别吸入6、12、18 μg NBDP 50 μL。吸入LPS 6 h后处死小鼠取肺组织, 观察肺组织病理损伤及水肿程度;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白〔NF-κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)、IκBα和NF-κB p65〕的磷酸化(p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65)水平及凋亡蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。收集支气管肺泡灌洗液(BALF), 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素(IL-1β、IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症指标的水平。结果光镜下显示, ARDS模型组存在明显水肿、出血, 肺泡结构破坏, 透明膜形成等, 符合ARDS肺组织病理学特征, 说明ARDS模型制备成功。ELISA显示, ARDS模型组BALF中MPO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均明显高于NS对照组;NBDP阴性对照组上述炎症指标与ARDS模型组差异无统计学意义;NBDP预处理组MPO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均明显低于ARDS模型组, 并呈一定剂量依赖性, 以18 μg NBDP作用更加显著, 与ARDS模型组比较差异有统计学意义〔MPO(ng/L):393.32±19.35比985.87±101.50, IL-1β(ng/L):43.05±5.11比97.68±10.88, IL-8(ng/L):84.64±2.32比204.00±17.37, TNF-α(ng/L):229.13±17.03比546.73±62.72, 均P<0.05〕。Western blotting显示, ARDS模型组p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65及caspase-3蛋白表达均较NS对照组明显升高;NBDP阴性对照组NF-κB信号通路蛋白及凋亡蛋白表达与ARDS模型组差异无统计学意义;NBDP预处理组p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65和caspase-3蛋白表达均较ARDS模型组明显降低, 且呈一定剂量依赖性, 以18 μg NBDP作用更加显著, 与ARDS模型组比较差异有统计学意义〔p-IKKα/β蛋白(p-IKKα/β/β-actin):0.15±0.02比0.42±0.04, p-IκBα蛋白(p-IκBα/β-actin):0.10±0.01比0.93±0.30, p-p65蛋白(p-p65/β-actin):0.22±0.05比1.37±0.21, 均P<0.05〕。结论 NBDP可剂量依赖性抑制ARDS肺组织炎症反应和细胞凋亡, 其机制与干扰NF-κB信号通路转导有关。
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