牡丹PsGAI基因的生物信息学及原核表达分析

作者：迟田钰; 盖树鹏; 刘春英; 袁延超; 孙阳; 张玉喜^*

来源：植物生理学报, 2021, 57(01): 121-128.

DOI：10.13592/j.cnki.ppj.2020.0302

• 牡丹
• 内休眠
• DELLA
• 原核表达

充足的低温累积和外源赤霉素(GA)处理是反季节催花的常用技术手段,探究内休眠解除的机理是解决催花不良的前提。前期研究表明, GA途径的激活是牡丹(Paeonia suffruticosa)花芽内休眠解除的关键环节,而DELLA蛋白是GA信号转导中的负调控因子。本研究从牡丹花芽转录组中筛选出DELLA家族成员中类GAI的EST序列,进行了生物信息学、表达模式和原核表达分析。同源性比对结果表明牡丹类GAI与拟南芥AtGAI序列同源性最高,全长c DNA为2 445 bp,编码区1 848 bp,共编码616个氨基酸,蛋白分子质量为67.26 kDa。实时定量PCR分析表明其在低温诱导的牡丹花芽休眠解除中呈极显著下调。为分析其在蛋白水平上的变化趋势,将PsGAI构建到含MBP的pMAL-c5X原核表达载体上,转化至大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达。在18°C、IPTG浓度为1 mmol·L-1的条件下诱导12 h, SDS-PAGE电泳检测MBP-PsGAI融合蛋白分子质量为112 kDa左右。实验结果为进一步纯化PsGAI蛋白及研究其在牡丹休眠解除中的作用提供理论依据。

• 单位
  生命科学学院; 青岛农业大学