微小RNA-320靶向FOXM1调控食管鳞癌放射敏感性的机制研究

作者：张潇文; 秦嗪; 孙新臣

来源：临床肿瘤学杂志, 2018, 23(06): 481-488.

• 食管鳞癌
• 放射敏感性
• 微小RNA-320(miR-320)
• 叉头框蛋白M1(FOXM1)

目的探讨微小RNA-320(miR-320)对食管鳞癌(ESCC)放射敏感性的影响及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测正常食管上皮细胞株HEEC和ESCC细胞株KYSE-150、TE-13和Eca-109中miR-320和叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达水平。采用脂质体法将miR-320模拟物(mimics)及其阴性对照(NC)转染至Eca-109细胞,分为转染组和对照组。QPCR和Western blotting检测miR-320 mimics转染后FOXM1的蛋白和mRNA水平以评价miR-320对FOXM1的调控作用。克隆形成实验评价克隆形成能力;免疫荧光实验检测γH2AX荧光焦点数;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法测定细胞凋亡;Western blotting测定XIAP、Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-320与FOXM1之间的靶向关系。结果 QPCR检测显示,Eca-109细胞中miR-320相对表达量最低,FOXM1相对表达量最高,故选取该细胞株进行后续实验。转染48 h后,转染组miR-320表达量显著高于对照组;QPCR和Western blotting检测发现转染组FOXM1 mRNA和蛋白水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,转染组Eca-109细胞克隆形成能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染组照射处理后1、6、24 hγH2AX焦点数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。转染组Eca-109细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,转染组Bax和cleaved caspase-3表达增加,XIAP和Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在野生型FOXM1-3’UTR质粒转染细胞中,miR-320 mimics转染组Eca-109细胞的荧光素酶活性明显低于对照组(P<0.05);而在突变型质粒转染细胞中,两组细胞的荧光素酶活性的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-320能增强ESCC细胞放射敏感性,可能与靶向抑制FOXM1表达有关。

• 单位
  南京医科大学第一附属医院; 江苏省人民医院