茄子U6启动子克隆及CRISPR/Cas9介导的基因编辑体系建立

作者：**; 王谧; 刘军; 周晓慧; 刘松瑜; 杨艳; 庄勇

来源：园艺学报, 2022, 49(04): 791-800.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2021-0265

• 茄子
• U6启动子
• CRISPR/Cas9
• 基因编辑

利用拟南芥（Arabidopsis thaliana）U6 RNA保守序列从茄子（Solanum melongena L.）基因组中鉴定到7个U6RNA，并采用PCR技术成功克隆其启动子序列。GUS染色结果表明4个茄子U6启动子（SmU6-1P、SmU6-2P、SmU6-4P和SmU6-7P）具有转录活性。构建以SmU6-1P/AtU6-P驱动SmWRKY4sgRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体，通过农杆菌介导侵染茄子子叶外植体得到T0代植株。以T0代植株的DNA为模板扩增WRKY4片段并对产物测序，测序结果显示以SmU6-1P构建的CRISPR/Cas9载体能靶向编辑SmWRKY4，编辑率为27.0%。在基于AtU6-P的T0代植株中未检测到碱基突变，表明在茄子遗传转化中，茄子SmU6启动子编辑效率高于拟南芥AtU6启动子。