永生化小鼠小胶质细胞P_2X_4siRNA靶点的筛选

作者：彭伟; 张咸伟; 田学愎; 邓乾; 姚文龙; 曹菲; 田玉科

来源：华中科技大学学报(医学版), 2008, (05): 657-660+703.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2008.05.025

• 小胶质细胞
• P2X4基因
• RNA干扰

目的筛选永生化小鼠小胶质细胞特异性P2X4siRNA。方法转染FAM-siRNA16h后,激光扫描共聚焦显微镜检测永生化小鼠小胶质细胞转染效率;将3条特异性siRNA经lipofectamine2000介导转染永生化小鼠小胶质细胞;72h后半定量RT-PCR观察干扰前后P2X4基因mRNA水平表达,比较对应不同位点的三对siRNA片段对P2X4基因的干扰效果,分析RNA干扰的特异性,从中筛选出特异性最高的一条siRNA;转染该序列72h后Western blot检测P2X4基因蛋白表达。结果激光扫描共聚焦显微镜显示转染效率达80%;三对siRNA片段中siRNA-F1的沉默效率最高,最大干扰效率达72.2%;Western blot显示转染siRNA-F1后P2X4基因蛋白表达下调。结论siRNA-F1可有效下调永生化小鼠小胶质细胞中P2X4基因mRNA表达水平,并且能明显下调P2X4蛋白表达。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院