Lasp1蛋白和铁蛋白在重组人骨形态发生蛋白2介导的小鼠骨髓间充质干细胞成骨过程中的调控机制研究

作者：卓灵剑; 郑健雄; 李杰; 杨运平; 张萍; 廖华^*; 胡稷杰^*

来源：中华创伤骨科杂志, 2018, 20(07): 611-616.

• 骨形态发生蛋白质类
• 铁蛋白质类
• 成骨细胞
• 间质干细胞

目的体外研究验证小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中Lasp1蛋白及铁蛋白在骨形态发生蛋白2(BMP2)介导成骨中的机制。方法从3～18个月龄的C57BL/6J小鼠体内分离、纯化出MSCs,并传代至第3代后,分为3组:实验组的高糖培养基内加入100μg/L的BMP2及成骨诱导液,阳性对照组加入单纯的成骨诱导液,空白对照组不做处理。3组分别诱导7、14、21d,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测4个成骨相关标记基因:Runt相关转录因子2、骨钙素、Osterix蛋白、骨桥素,以确认是否分化成骨。确认成骨后,采用蛋白印迹法检测成骨结果阳性组细胞中的Lasp1蛋白及铁蛋白各自的表达浓度。以慢病毒转染基因沉默技术下调小鼠MSCs的Lasp1蛋白的基因表达,并重新进行BMP2介导的诱导成骨过程,再进行上述成骨标志基因的RT-qPCR检测。结果 RT-qPCR过程显示实验组和阳性对照组显示诱导成骨,且实验组诱导成骨效果更佳。蛋白印迹法检测结果显示仅实验组中的Lasp1蛋白明显表达量下调而铁蛋白表达量明显上调。采用慢病毒转染基因沉默技术下调Lasp1蛋白表达量后,成骨相关基因表达量明显上调。结论 BMP2可以介导小鼠MSCs诱导成骨,且成骨诱导效果极佳。结合前期研究,我们可以确认Lasp1蛋白及铁蛋白参与调控BMP2的信号通路,且Lasp1蛋白对BMP2介导的诱导成骨呈抑制作用。

• 单位
  南方医科大学南方医院; 南方医科大学; 基础医学院; 解剖学教研室