miR-181d-5p对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及机制

作者：李祥双; 于海霞; 叶燕珍; 温慧敏; 杜丽苹; 傅丽玲; 于卫华

来源：山东医药, 2022, 62(22): 42-46.

• 宫颈癌
• 微小RNA-181d-5p
• DEAD盒多肽3
• 放射敏感性

目的 探讨微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及机制。方法 X射线照射构建放疗抵抗的宫颈癌细胞株HeLa-X,qRT-PCR法检测人宫颈癌细胞SiHa、HeLa、C33A、HCC-94、HeLa、HeLa-X及人正常宫颈上皮细胞HCer Epic中miR-181d-5p表达，使用LipofectamineTM2000试剂盒对HeLa-X细胞进行转染，分别转染miR-181d-5p模拟物阴性对照、miR-181d-5p模拟物、DDX3 siRNA阴性对照、DDX3 siRNA、DDX3 siRNA和miR-181d-5p抑制物阴性对照、DDX3 siRNA和miR-181d-5p抑制物序列5μL，并用4 Gy X射线照射处理，将细胞随机分为空白组、4 Gy组、4 Gy+miR-NC组、4 Gy+miR-181d-5p mimics组、4 Gy+si-NC组、4 Gy+si-DDX3组、4 Gy+siDDX3+anti-miR-NC组、4 Gy+si-DDX3+anti-miR-181d-5p组，CCK-8法检测各组细胞增殖情况；流式细胞术检测各组细胞凋亡情况；双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-181d-5p与DEAD盒多肽3(DDX3)的靶向关系；Western blotting法检测各组细胞中DDX3蛋白表达。结果 miR-181d-5p在人宫颈癌细胞SiHa、HeLa、C33A、HCC-94、HeLa中的表达低于人正常宫颈上皮细胞HCer Epic，且HeLa表达最低(P均<0.05)；与HeLa细胞比较，HeLa-X细胞中miR-181d-5p表达降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实DDX3为miR-181d-5p的靶基因，且miR-181d-5p靶向负调控DDX3表达；与空白组比较，4 Gy组HeLa-X细胞OD450值、DDX3蛋白表达降低、细胞凋亡率升高(P均<0.05)；与4 Gy组和4 Gy+miR-NC组比较，4 Gy+miR-181d-5p mimics组细胞OD450值降低、细胞凋亡率升高(P均<0.05)；与4 Gy组和4 Gy+si-NC组比较，4 Gy+si-DDX3组HeLa-X细胞中DDX3蛋白表达、细胞OD450值降低，细胞凋亡率升高(P均<0.05)；与4 Gy+si-DDX3组和4 Gy+si-DDX3+anti-miR-NC组比较，4 Gy+si-DDX3+anti-miR-181d-5p组HeLa-X细胞中DDX3蛋白表达、细胞OD450值升高，细胞凋亡率降低(P均<0.05)。结论 miR-181d-5p在宫颈癌细胞中低表达，过表达miR-181d-5p通过靶向下调DDX3表达，进而增强HeLa-X细胞的放射敏感性。