miR-449a靶向调控外周血Toll样受体5影响风湿性心脏病发生发展的分子机制研究

作者：李宝亮; 苏华; 李梦嘉; 耿丽娜; 马俊帅

来源：中国免疫学杂志, 2022, 38(17): 2057-2063.

• 风湿性心脏病
• miR-449a
• TLR5
• 增殖
• 凋亡
• NF-κB信号通路

目的：研究微小RNA-449a(miR-449a)是否通过靶向外周血中的Toll样受体5(TLR5)影响风湿性心脏病的发生发展。方法：实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测风湿性心脏病患者外周血中TLR5和miR-449a的表达水平。在风湿性心脏病心肌细胞中转染miR-449a模拟物或TLR5小干扰RNA si-TLR5。采用qRT-PCR检测miR-449a表达，Western blot分析细胞核相关抗原Ki67(Ki67)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、TLR5、磷酸化p65(p-p65)和磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达，MTT测定细胞增殖，流式细胞仪评估细胞凋亡，ELISA测定炎症因子IL-1β、TNF-α水平。Starbase靶位点预测软件与双荧光素酶报告基因分析miR-449a与TLR5之间的靶向关系。在风湿性心脏病心肌细胞中共转染miR-449a模拟物和TLR5过表达质粒pcDNA-TLR5，观察细胞增殖、凋亡和NF-κB信号通路活性变化。结果：风湿性心脏病患者外周血中miR-449a的表达水平明显降低，TLR5 mRNA和TLR5蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-449a明显提高风湿性心脏病心肌细胞的Ki67蛋白表达水平、细胞存活率，显著降低Cleaved-caspase-3、p-p65、p-IκBα蛋白表达水平、细胞凋亡率和IL-1β、TNF-α水平（P<0.05）。低表达TLR5明显提高风湿性心脏病心肌细胞的Ki67蛋白表达水平、细胞存活率，显著降低Cleaved-caspase-3蛋白表达水平、凋亡率（P<0.05）。miR-449a通过靶向TLR5调控TLR5蛋白的表达。高表达TLR5后，miR-449a对风湿性心脏病心肌细胞增殖、Ki67蛋白表达的促进作用，以及miR-449a对细胞凋亡、Cleaved-caspase-3、p-p65、pIκBα蛋白表达和IL-1β、TNF-α水平的抑制作用被逆转。结论：miR-449a通过靶向TLR5抑制NF-κB信号通路活性，促进风湿性心脏病心肌细胞的增殖与抑制其凋亡。

• 单位
  河北北方学院附属第一医院