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摘要
【目的】炭疽病是南方葡萄的重要病害,刺葡萄是高抗炭疽病的重要野生葡萄资源,目前尚未见到关于葡萄炭疽菌侵染后的葡萄果皮酵母cDNA文库的报道。本文构建了葡萄炭疽菌侵染后刺葡萄果皮的酵母cDNA文库,为葡萄抗炭疽病分子机理研究提供材料基础。【方法】提取葡萄炭疽菌侵染后1、3、7 d的刺葡萄福安果皮总RNA,采用SMART的方法将总RNA反转录合成c DNA,使用试剂盒将cDNA纯化,随后将纯化产物(双链cDNA)酶切处理及短片段去除,获得质量良好的cDNA。将其克隆到pGADT7三框质粒载体,经纯化精制,获得初级c DNA文库。对初级cDNA文库扩增后,提取文库质粒转化到Y187酵母菌中,制作扩增的酵母文库,并对酵母文库进行鉴定。【结果】经检测所构建的初级cDNA文库库容约为5.2×106 cfu,重组率约为97.92%,插入的片段长度主要分布在400～2 000 bp,具有良好的多态性。进一步获得的Y187酵母文库滴度约为6.0×107 cfu·mL-1。【结论】构建的葡萄炭疽菌诱导的刺葡萄果皮酵母cDNA文库质量符合酵母双杂交筛选要求,为筛选葡萄炭疽病侵染过程中的互作蛋白奠定基础。
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