本发明公开了一种枯草芽孢杆菌重组菌株及其制备方法与应用,属于生物技术领域。本发明所提供的重组菌株是将枯草芽孢杆菌中的十个蛋白酶基因敲除或失活得到,这十个蛋白酶基因为:nprE、nprB、aprE、mpr、bpf、epr、vpr、wprA、spollAC和srfAC。本发明通过同源重组方法进行前述10个蛋白酶基因的敲除,得到的枯草芽孢杆菌重组菌株生长快、且外源蛋白表达量高。因此,该重组菌株可作为外源蛋白高效表达的宿主。