猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)多克隆抗体制备与鉴定

作者：焦文龙; 杨兴淼; 梁真洁; 潘俊慧; 曹瑞兵^*

来源：畜牧与兽医, 2022, 54(10): 116-121.

• 猪源TIM-1
• 黏蛋白功能域
• 原核表达
• 多克隆抗体

为了探究猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(sTIM-1)的生物学功能，制备sTIM-1多克隆抗体，通过软件分析sTIM-1蛋白抗原表位及亲水性，并设计引物，以sTIM-1基因为模板扩增sTIM-1黏蛋白功能域编码基因(sTIM-1-M),成功构建了重组表达质粒pET28a-sTIM-1-M,并在大肠杆菌Rosetta 2中诱导表达。以纯化的重组蛋白sTIM-1-M与佐剂混合免疫新西兰大白兔制备多抗血清。SDS-PAGE及Western blot证实了该重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达，分子量约为36 kDa。经Western blot与免疫荧光试验(IFA)验证sTIM-1多抗血清可特异性识别293T细胞表达的sTIM-1。免疫沉淀(IP)结果显示制备的多抗血清可与sTIM-1蛋白互作。以上数据表明本研究制备的sTIM-1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。sTIM-1多克隆抗体的制备为进一步研究sTIM-1参与病毒入侵细胞的机制奠定了基础。