LKB1基因沉默增强AICAR诱导大肠癌HCT116细胞凋亡的作用

作者：柳发铿; 何裕隆

来源：消化肿瘤杂志(电子版), 2014, 6(02): 103-108.

• LKB1
• AICAR
• HCT116大肠癌细胞
• 细胞凋亡

目的探讨肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)表达被抑制的情况下,腺苷酸活化蛋白激酶(Adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)激活剂AICAR对大肠癌HCT116细胞诱导凋亡作用及相关机制。方法采用慢病毒的方法构建LKB1敲除的HCT116-LKB1-shRNA细胞株及对照HCT116-PLKO.1细胞株。用不同浓度的AICAR作用于HCT116-PLKO.1及HCT116-LKB1-shRNA细胞,用SRB法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平及细胞周期改变,蛋白质印迹法检测p AMPK、P21、P53及caspase-3等蛋白的表达水平,比较两组细胞间的差异。结果AMPK激活剂AICAR处理48小时后,随着AICAR浓度的升高,两组细胞的生长抑制率均逐渐升高,呈浓度依赖;而且HCT116-LKB1-shRNA细胞对AICAR的敏感性高于对照组。蛋白印迹法的结果发现,AICAR处理后两组细胞caspase-3均被激活,且HCT116-LKB1-shRNA细胞组中的表达显著高于HCT116-PLKO.1组。细胞凋亡分析结果显示AICAR导致HCT116-LKB1-shRNA细胞的凋亡高于HCT116-PLKO.1组。细胞周期分析的结果显示,AICAR处理12小时后HCT116-PLKO.1细胞周期停滞于G0/G1期,而HCT116-LKB1-shRNA细胞周期未出现明显停滞。免疫印迹的结果提示HCT116-PLKO.1细胞中P21基因被激活,但HCT116-LKB1-shRNA细胞P21的表达并未升高。结论 LKB1基因的沉默增强了HCT116细胞对AICAR的敏感性。可能是AICAR在HCT116细胞中通过LKB1-AMPK通路激活P21,导致细胞周期停滞,避免肿瘤细胞凋亡。

• 单位
  中山大学; 中山大学附属第一医院