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摘要
目的探讨miR-558通过对叉头框转录因子C1(Forkhead box protein C1,FOXC1)的调控从而对人卵巢癌腺癌细胞(SKOV3)增殖和侵袭能力的影响。方法选择2014年1月至2017年12月郑州大学第三附属医院妇产科收治的上皮性卵巢癌病人25例、交界性卵巢上皮性肿瘤病人25例和良性卵巢上皮性肿瘤病人25例,三组病例均行手术治疗,取其部分经手术切除的卵巢组织标本,使用实时荧光定量PCR技术来分析微小RNA-558(miR-558)的表达水平。把卵巢癌SKOV3细胞分成三组,分别为miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组。通过靶基因预测网站来预测miR-558的靶基因(FOXC1基因),通过荧光素酶报告基因实验来验证miR-558对FOXC1基因表达的调控作用。通过实时荧光定量-PCR技术和蛋白印迹法来分析转染后各组细胞的miR-558和FOXC1的表达水平。通过细胞增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8法)检测三组细胞的增殖率。通过基质胶侵袭实验检测三组细胞的侵袭能力。结果实时荧光定量-PCR结果显示,在上皮性卵巢癌、交界性卵巢上皮性肿瘤和良性卵巢上皮性肿瘤病人的卵巢组织中,miR-558的相对表达水平分别为(3.43±0.42)、(2.47±0.35)、(1.37±0.31);在miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组中,SKOV3细胞miR-558的表达水平分别为(2.37±0.17)、(0.64±0.17)、(1.14±0.11)。在miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组中,SKOV3细胞的FOXC1基因转录出的信使RNA(mRNA)表达水平分别为(0.51±0.10)、(2.27±0.12)、(0.99±0.11)。荧光素酶报告基因实验结果显示,SKOV3细胞被含miR-558的质粒以及含FOXC1基因的重组质粒共同转染后,的荧光素酶活性下降了49.50%(P<0.05)。蛋白印迹结果显示,上述三组SKOV3细胞中,FOXC1蛋白的表达水平分别为(0.83±0.07)、(2.17±0.15)、(1.47±0.21)。CCK-8检测结果显示,不同时间miR-558模拟物组SKOV3细胞的增殖率明显高于阴性对照组(P<0.05),不同时间miR-558抑制物组SKOV3细胞的增殖率明显低于阴性对照组(P<0.05)。基质胶侵袭实验结果显示,上述三组SKOV3细胞穿透基底膜的细胞数分别为(158.33±9.45)、(67.01±10.58)、(117.67±16.86)(P<0.05)。结论 miR-558能够通过靶向调控FOXC1的表达,促进SKOV3细胞的增殖能力和侵袭能力,从而参与卵巢癌的发生发展。
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单位河南省人民医院; 郑州大学第三附属医院
