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摘要
目的 研究不同加药方式下鬼针草提取物的抗肠道病毒71型（EV71）活性。方法 将人恶性胚胎横纹肌瘤细胞（RD）分为EV71对照组、正常RD细胞组、利巴韦林组、鬼针草提取物组（7.81、3.91、1.95、0.98、0.49、0.25 mg/mL，感染后加药方式加设0.13 mg/mL），鬼针草提取物分别按照感染前加药（鬼针草提取物处理后再加EV71）、感染后加药（EV71感染后加入鬼针草提取物）、病毒与药物同时加入（鬼针草提取物和EV71同时加入）三种加药方式进行加药，通过噻唑蓝（MTT）比色法测定鬼针草提取物对RD细胞的半数细胞毒性浓度（CC50）及三种加药方式下鬼针草提取物抗EV71的作用，计算选择指数（SI）。荧光定量PCR法检测鬼针草提取物在三种加药方式下对EV71 VP1基因表达水平的影响；以及EV71感染RD细胞后8 h内不同时序加药组EV71 VP1基因表达水平差异。结果 鬼针草提取物的CC50为8.83 mg/mL，当鬼针草提取物浓度为7.81 mg/mL时，细胞存活率为（72.79±2.69）%，因此选择7.81 mg/mL作为抗病毒实验给药浓度。感染前加药、感染后加药、药物与病毒同时加入三种加药方式的SI指数分别为4.50、35.32、21.54，且三种加药方式的EV71 VP1基因的表达量分别为（0.64±0.04）、（0.09±0.06）、（0.07±0.07），均低于相应EV71对照组的（1.00±0.05）、（0.92±0.11）、（1.02±0.08），差异均有统计学意义（t=10.01、7.83、10.81,P均0～2 h、>2～4 h、>4～6 h、>6～8 h）VP1基因的表达量分别为（0.15±0.02）、（0.19±0.03）、（0.30±0.03）、（0.28±0.03），均低于EV71对照组（0.97±0.03），差异均有统计学意义（t=35.50、32.96、26.59、29.51,P均0～2 h与>2～4 h加药组分别与>4～6 h与>6～8 h加药组比较，EV71 VP1表达水平降低，差异均有统计学意义（t=6.18、6.07、4.10、3.78,P均<0.05)。结论 鬼针草提取物对EV71具有一定的阻断、抑制和直接杀病毒作用，能抑制EV71 VP1基因的表达，而且抑制EV71 VP1基因表达前期加药效果好。
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