EHECO157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC)的表达纯化及免疫检测的初步应用

作者：罗云; 易勇; 毛旭虎; 邹全明; 肖敏; 敬华

来源：中国卫生检验杂志, 2008, (08): 1473-1476+1555.

• 肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7
• 紧密粘附素
• 克隆表达
• 免疫检测 EHEC O157:H7
• Intimin
• Protein purification
• Immunodetection

目的:克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC),摸索其免疫检测的初步应用。方法:设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增紧密粘附素胞外特异性片段的编码基因eaeC,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-21a(+)-eaeC,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测。目的蛋白经包涵体洗涤,使用含谷胱甘肽氧化还原系统的复性缓冲液进行稀释并结合透析复性后,再用阴离子交换柱Resource Q和分子筛柱Superdex200进行纯化。将所得高纯度目的蛋白包被ELISA酶标板,对实验动物的免...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 中国人民解放军第306医院