ROCK1蛋白通过ROS调节M1巨噬细胞的极化

作者：吴淑娟; 覃晓琳; 陈娇^*; 杨菁^*

来源：生殖医学杂志, 2022, 31(11): 1568-1573.

• Rho相关激酶1(ROCK1)
• THP1细胞
• M1型巨噬细胞
• 炎症因子
• 活性氧(ROS)

目的 分析Rho相关激酶(ROCK1)对巨噬细胞M1极化的影响。方法 巨噬细胞系THP1细胞接种于6孔板中，以每孔100 ng/ml终浓度的佛波酯(PMA)诱导48 h细胞贴壁，分化为M0巨噬细胞。向M0细胞的培养基中添加干扰素-γ(IFN-γ)20 ng/ml、脂多糖(LPS)100 ng/ml继续诱导48 h设为M1组；向M0细胞的培养基中添加IFN-γ20 ng/ml、LPS 100 ng/ml、ROCK1抑制剂Y27632 1μmol/L继续诱导48 h设为M1+Y27632组；添加等量的PBS 48 h设为对照M0组。观察THP1来源巨噬细胞向经典激活的巨噬细胞(M1)极化过程中的形态改变；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化性蛋白1(MCP1)、CXC趋化因子配体16(CXCL16)和ROCK1 mRNA表达水平；Western blot检测ROCK1蛋白表达量；流式细胞术检测各组细胞表面M1型标志物CD86的表达及抑制ROCK1后各组细胞活性氧(ROS)的水平。结果 THP1巨噬细胞向M1极化过程中，M1组细胞比对照M0组伸出更多伪足。与对照M0组相比，M1组细胞IL-6和CXCL16的mRNA水平均显著增加(P<0.05);M1组细胞中ROCK1的蛋白和mRNA水平均显著增加(P<0.05)。检测添加ROCK1抑制剂Y27632后各组中促炎因子表达水平的变化，结果显示：与对照M0组相比，M1组中促炎因子IL-6、TNF-α、MCP-1、CXCL16的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);M1+Y27632组IL-6、TNF-α、MCP-1、CXCL16的mRNA表达水平显著低于M1组(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示，M1组中CD86阳性细胞的比例显著高于对照M0组(P<0.01),M1+Y27632组CD86阳性细胞的比例显著低于M1组(P<0.05);M1组细胞内的ROS水平较对照M0组显著上升(P<0.01),M1+Y27632组ROS的水平显著低于M1组(P<0.01)。结论 抑制ROCK1可能通过ROS抑制THP1巨噬细胞向M1的极化。

• 单位
  武汉大学人民医院