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摘要
目的 探讨外泌体介导的miR-663a通过调控转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 从人骨髓间充质干细胞(BMSC)培养液上清中分离外泌体，透射电子显微镜观察外泌体结构，Western印迹检测外泌体中CD63、CD81蛋白表达；将miR-NC、miR-663a mimics分别转染于外泌体，并分组为：EXO组(未转染的外泌体)、EXO-miR-NC组、EXO-miR-663a组，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组外泌体中miR-663a的表达；将上述各组外泌体分别与SW480细胞共培养，并分别命名为SW480+EXO组、SW480+EXO-miR-NC组、SW480+EXO-miR-663a组，在SW480+EXO-miR-663a组中加入TGF-β1/Smad信号通路激活剂SRI-011381,命名为SW480+EXO-miR-663a+SRI组，另取SW480细胞记为SW480组作为对照，激光共聚焦显微镜观察SW480细胞内吞外泌体；Transwell实验检测各组细胞的侵袭与迁移；Western印迹检测各组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达。结果 透射电子显微镜观察到BMSC细胞的外泌体均呈现出直径为30～100 nm的囊泡状结构，Western印迹结果表明，CD63和CD81蛋白在BMSC细胞的外泌体中高表达，而在细胞裂解液中几乎不表达；EXO组中miR-663a的表达水平显著高于BMSC细胞(P<0.05);与EXO组和EXO-miR-NC组比较，EXO-miR-663a组中miR-663a的表达水平显著升高(P<0.05);激光共聚焦显微镜结果显示，PKH26标记红色荧光的外泌体主要位于SW480细胞胞质内，并分布在核周围，大部分SW480细胞可见到红色荧光信号；与SW480组比较，SW480+EXO组细胞侵袭数目、迁移数目及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达显著降低(P<0.05);与SW480+EXO组和SW480+EXO-miR-NC组比较，SW480+EXO-miR-663a组细胞侵袭数目、迁移数目及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达进一步显著降低(P<0.05);SW480+EXO-miR-663a+SRI组细胞侵袭数目、迁移数目及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达显著高于SW480+EXO-miR-663a组(P<0.05)。结论 外泌体介导的miR-663a通过抑制TGF-β1/Smad信号通路来抑制结肠癌细胞的侵袭和迁移。
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