EGFP-MAD2融合基因表达载体的构建及功能验证

作者：于晓晨; 梁剑青; 王嫚娜; 牛祖彪; 陈昭烈; 孙强

来源：生物技术通讯, 2018, 29(03): 335-339.

DOI：10.3969/j.issn.1009-0002.2018.03.005

• 绿色荧光蛋白(EGFP)
• 有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2)
• 融合基因
• 细胞周期阻滞

目的:构建绿色荧光蛋白(EGFP)与有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2)融合基因表达载体,并初步验证融合基因的功能。方法:采用PCR技术扩增EGFP-MAD2融合基因,连接入T载体进行序列测定,随后克隆入逆转录表达载体p QCXIP-EGFP-N1获得重组质粒,采用脂质体转染293FT细胞,荧光显微镜观察融合蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期。结果:获得序列正确的EGFP-MAD2融合基因及其表达载体p QCXIP-EGFP-MAD2;EGFP-MAD2基因可在293FT细胞中表达;流式分析显示EGFP-MAD2表达的细胞G2/M期比例增加。结论:构建了EGFP-MAD2融合基因表达载体,EGFP-MAD2融合蛋白的表达可以诱导细胞发生G2/M期阻滞。