稳定过表达miR-224的胰腺黏液性囊腺癌MCC1细胞株的建立

作者：彭小波; 郭承涛; 应明真; 李洁; 宋乐乐; 吴燕君; 詹丽杏; 湛先保^*

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2018, 25(07): 721-725.

DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2018.07.011

• miR-224
• 慢病毒载体
• 胰腺黏液性囊腺癌细胞株

目的:构建hsa-micro RNA-224(miR-224)过表达慢病毒载体,建立稳定过表达miR-224的胰腺黏液性囊腺癌MCC1细胞株。方法:设计miR-224前体过表达基因片段,应用q RT-PCR法扩增目的基因片段,通过基因重组技术将目的基因片段插入GV369慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序比对分析。用GV369-miR-224慢病毒感染胰腺黏液性囊腺癌MCC1细胞,建立稳定过表达miR-224的MCC1细胞株。荧光显微镜下观察GV369-NC及GV369-miR-224慢病毒表达载体的转染效果,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCC1、GV369-miR-224-MCC1和GV369-NC-MCC1组细胞中miR-224的表达水平。结果:成功构建GV369-miR-224慢病毒表达载体质粒。GV369-miR-224-MCC1、GV369-NC-MCC1细胞在荧光显微镜下均发出绿色荧光。miR-224表达水平在GV369-miR-224-MCC1细胞中显著高于阴性对照GV369-NC-MCC1细胞和空白对照MCC1细胞(23.45±1.94 vs2.11±0.38,1.46±0.11,均P<0.01),而两组对照组之间miR-224表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建稳定过表达miR-224的胰腺黏液性囊腺癌MCC1细胞株,为探讨miR-224在胰腺黏液性囊腺癌中的功能及发病机制提供新的细胞模型。

• 单位
  长海医院; 中国人民解放军第二军医大学; 中国科学院上海生命科学研究院