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摘要
采用微量稀释法测定月桂酸单甘油酯(GML)对致病性念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),利用时间-抑菌曲线分析GML对念珠菌的动态抑菌作用;通过XTT法测定GML对生物被膜形成早期1～4 h黏附阶段以及成熟生物被膜的抑制作用;采用Sport assay结合激光共聚焦显微镜检测其对念珠菌生物被膜细胞活性和形态结构的影响,进而显微镜观察不同浓度GML作用不同时间抑制菌丝和芽管生成的程度,以及对生物被膜细胞表面疏水性的影响;最后用分子生物学qRT-PCR检测白色念珠菌生物被膜形成相关基因ALS3、HWP1、ECE1、ERG11及克柔念珠菌ERG11在不同处理组中表达水平的变化。结果显示,GML对克柔念珠菌的MIC为15.625 mg/L,MFC为31.25 mg/L,对白色念珠菌的MIC为250 mg/L,MFC为500 mg/L;GML作用有效延长了真菌生长的延滞期;对不同生长阶段(前、中、成熟期)生物被膜均有显著抑制作用,克柔念珠菌生物被膜的最低黏附抑菌质量浓度(SMIC50)为62.5 mg/L,白色念珠菌SMIC50>1 000 mg/L;GML不仅可以抑制生物被膜的形成,还可以破坏成熟生物被膜的维持,有效降低生物被膜的厚度和活力;并且对菌丝的形成及芽管长度具有明显的抑制作用,显著降低生物被膜细胞表面疏水性;白色念株菌ALS3、HWP1、ECE1、ERG11和克柔念珠菌ERG11基因均出现了不同倍数的下调趋势。结果表明,GML对浮游态和生物被膜态白色念珠菌和克柔念珠菌具有较好的抑制作用,尤其对克柔念珠菌抑菌效果明显。GML可以通过降低黏附、形态转换和杀真菌作用来抑制致病性念珠菌生物被膜的形成,还可以破坏成熟生物被膜的维持,有效降低生物被膜的厚度和活力。
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