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摘要
建立高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)分析升降散(Shengjiang Powder, SJP)中大黄素和姜黄素类等化合物成分，探讨其对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠的防治作用。采用HPLC测定升降散中大黄素和姜黄素类化合物含量；SPF级雌性C57BL/6小鼠72只，随机分为对照组、模型组、升降散低剂量组、升降散中剂量组、升降散高剂量组、阳性对照组。每组12只。除对照组外，其余组小鼠均构造EAE模型。免疫后第1天起，升降散组小鼠分别以升降散灌胃，阳性对照组给予醋酸泼尼松灌胃，对照组和模型组给予等体积超纯水灌胃。记录小鼠一般情况、症状评分及体质量。第21天，取小鼠脑组织，分别采用苏木素-伊红(HE)染色和劳克坚牢蓝(LFB)染色检查脑组织病理变化、免疫组化(IHC)测定髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein, MBP)水平；蛋白免疫印迹(Western blot)检测闭合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白(claudin-5)表达，以及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、酪氨酸蛋白激酶2(janus kinase 2,JAK2)/信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路蛋白及其磷酸化水平；实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测IL-6、JAK2和STAT3的信使核糖核酸(mRNA)表达水平；最后对SJP中以大黄素、姜黄素为首的6种主要有效成分，采用分子对接验证，评价各化合物分别与IL-6、JAK2和STAT3蛋白的结合效能。结果显示，建立了SJP的HPLC分析方法，其精密度、重复性、稳定性和回收率试验均符合要求。与模型组比较，SJP能降低EAE小鼠Konoz临床症状评分，减轻小鼠脑白质炎症浸润以及髓鞘脱失；同时，提高occludin和claudin-5蛋白的表达；qPCR显示SJP治疗后下调了IL-6、JAK2和STAT3 mRNA表达，Western blot表明SJP组IL-6/JAK/STAT3蛋白及其磷酸化水平与模型组比较明显下调，差异有统计学意义。最后，分子对接显示SJP中以大黄素、姜黄素为首的6种主要有效成分与IL-6、JAK2和STAT3蛋白的结合效能良好。建立的HPLC简便、精确、灵敏度高，可用于SJP中大黄素和姜黄素类化合物含量的同时测定。SJP可能通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路，保护血脑屏障，减轻脑组织炎症反应及髓鞘脱失，从而改善EAE的临床症状。
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