鸡白细胞介素2和白细胞介素18基因的原核及真核表达

作者：张艳雯; 张鹤曦; 覃静; 周晴云; 唐子琼

来源：西南农业学报, 2020, 33(12): 2975-2982.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2020.12.042

• 鸡白细胞介素2
• 鸡白细胞介素18
• 克隆
• 原核表达
• 真核表达

【目的】克隆并原核和真核表达无特定病原(SPF)鸡白细胞介素2(ChIL-2)和白细胞介素18(ChIL-18)基因,为后续开展ChIL-2和ChIL-18蛋白功能、生物学活性及联合应用的免疫佐剂研究打下基础。【方法】运用RT-PCR扩增ChIL-2和ChIL-18基因,并进行测序和序列比对分析,分别构建其重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18及重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18,并将重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18分别转化大肠杆菌BL21,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18分别转染非洲绿猴肾(Vero)细胞。【结果】重组原核表达质粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18经IPTG诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明融合蛋白ChIL-2和ChIL-18在大肠杆菌中获得高效表达,表达的蛋白分子量分别为27和23 kD;重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18转染Vero细胞24 h后进行倒置荧光显微镜检测,结果显示融合蛋白ChIL-2和ChIL-18在Vero细胞中均有较高表达。【结论】克隆获得的ChIL-2和ChIL-18基因可在原核和真核细胞中高效表达。

• 单位
  南宁学院