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摘要
甜菜苷配基-6-O-葡萄糖基转移酶(6GT)是石竹目植物中合成甜菜红素的关键酶,具有催化甜菜红苷元糖基化生成甜菜红素的功能。本研究以藜麦为材料,通过近缘物种6GT序列比对分析,使用RT-PCR扩增获得了藜麦6GT基因的全长c DNA序列,并对其进行生物信息学、表达特异性及原核表达分析。结果表明, Cq6GT基因ORF全长1 452 bp,编码483个氨基酸, Cq6GT蛋白相对分子量为53.98 kDa。该蛋白无信号肽,疏水系数为–0.205,不稳定指数为44.6,属于不稳定亲水蛋白。多序列比对及进化树分析显示Cq6GT蛋白与三色苋6GT和彩虹菊6GT蛋白氨基酸序列高度相似,具有共同的糖基转移酶家族PLN02554功能保守结构域。荧光定量PCR显示Cq6GT基因在红色、红条纹、黄条纹和绿色的藜麦茎中均有表达,其中红色茎表达量最高,绿色茎表达量最低,红色藜麦中茎和叶的Cq6GT表达量上显著高于根。将Cq6GT构建到pET28a原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21 (DE3)诱导表达, SDS-PAGE电泳显示在53.98 kDa大小处有特异性条带,与预测的目的蛋白分子量大小一致。本研究结果为进一步探究Cq6GT基因功能奠定了基础。
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