外源性绵羊肺腺瘤病毒实时荧光RPA检测方法的建立

作者：刘然; 张琳; 刘淑英^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(02): 278-284.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.02.09

• 绵羊肺腺瘤
• 绵羊肺腺瘤病毒
• 重组酶聚合酶恒温扩增技术

为实现对外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)的快速检测，根据基因组中序列保守的env基因设计特异性引物和探针，通过优化反应条件和反应体系，建立了exJSRV的实时荧光RPA检测方法，并通过灵敏度、特异性、重复性及样品检测进行评价。结果显示，该方法最佳反应温度为40℃,用时短，仅需20 min即可完成扩增；灵敏度高，最低可检测到106 ng/L的cDNA模板，纯化后的cDNA模板最低可检测到10 ng/L,与PCR结果一致；特异性强，能准确检测到exJSRV,与小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊败血性链球菌(OSS)、牛肠道病毒(BEV)、传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、肺炎支原体(MO)等继发呼吸道症状的病原无交叉反应；重复性好，对于相同质量浓度的模板cDNA检测结果一致；可有效检测出病羊肺组织、鼻液及外周血白细胞内的exJSRV,与PCR结果一致。结果表明，该方法可实现exJSRV的快速检测，为绵羊肺腺瘤病(OPA)的诊断及防控提供可靠依据。

• 单位
  内蒙古农业大学