ASTL抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响

作者：赵舒雅; 李航; 樊赛军^*

来源：国际放射医学核医学杂志, 2021, 45(12): 773-782.

DOI：10.3760/cma.j.cn121381-202009033-00125

• 宫颈肿瘤
• 辐射耐受性
• 抗体
• 龙虾肽酶样金属内肽酶

目的探讨龙虾肽酶样金属内肽酶(ASTL)抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响。方法培养人宫颈癌ME-180、HeLa细胞, 根据细胞处理方法的不同, 按以下方式进行分组。(1)将ME-180细胞分为4组:对照组、照射组(4 Gy)、ASTL抗体组、ASTL抗体+照射组(4 Gy), 采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测每组细胞的增殖能力与存活情况, 并于照射后0、24、48、72 h采用免疫荧光、Western blot实验检测ASTL在细胞中的定位情况。(2)将ME-180细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组, 分别进行0、2、4、8 Gy照射, 并采用克隆形成实验检测每组细胞的增殖能力。(3)将HeLa细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组, 分别进行0、2、4、8 Gy照射, 采用MTT实验检测细胞的存活情况。(4)将ME-180细胞分为2组:短发夹RNA对照组(sh-对照组)、短发夹RNA ASTL转染组(sh-ASTL组), 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot实验检测蛋白激酶B (AKT)等靶基因的表达情况;同时, 分别用0、5、10 nmoL/L的抗体处理ME-180细胞, 采用Western blot实验检测抗体中和对靶基因表达情况的影响。(5)将ME-180细胞分为2组:对照组、照射组(4 Gy), 采用Western blot实验检测ASTL、AKT等靶基因的表达情况。以上照射均使用137Cs γ射线照射源, 剂量率为1 Gy/min。组间比较采用独立样本t检验。结果 (1)EdU染色实验结果显示, 与照射组相比, ASTL抗体+照射组(4 Gy)抑制了ME-180细胞的增殖, 差异有统计学意义(t=9.25, P< 0.05);MTT实验结果显示, 与照射组相比, ASTL抗体+照射组(4 Gy)在照射后24、48、72 h时, ME-180细胞生长速度明显降低, 且差异均有统计学意义(t=5.17、10.32、14.27, 均P<0.05)。免疫荧光、Western blot实验结果显示, 4 Gy照射后24 h时, ME-180细胞中ASTL在细胞质的定位显著增加, 照射后48～72 h, ASTL重新定位于细胞膜上。(2)克隆形成实验结果显示, 与照射组相比, ASTL抗体+照射组能够抑制8 Gy照射后ME-180细胞的增殖, 且差异有统计学意义(t=7.63, P<0.05)。(3) HeLa细胞MTT实验结果显示, 与照射组相比, ASTL抗体+照射组能够降低2、4、8 Gy照射后HeLa细胞的存活率, 且差异均有统计学意义(t=4.27、9.66、15.71, 均P<0.05)。(4)qRT-PCR实验结果显示, ASTL干扰片段转入后, AKT的表达水平下调(t=13.94, P<0.05), 同时, Western blot实验结果表明, ASTL干扰或加入ASTL抗体能够降低AKT等靶基因的表达水平。(5)Western blot实验结果显示, 与对照组相比, 照射组(4 Gy) ASTL、AKT等靶基因的表达水平显著升高。结论人宫颈癌ME-180细胞的放射敏感性与ASTL的水平相关, ASTL抗体或sh-ASTL能够增强照射后ME-180细胞的放射敏感性。

• 单位
  放射医学研究所; 中国医学科学院北京协和医学院