猪轮状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

作者：柳佳佳; 梁海英; 曾智勇^*; 汤德元; 王彬; 叶泥; 边孟婷; 黄书; 田红利; 潘向英

来源：中国兽医科学, 2024, (01): 1-7.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0005

• 猪轮状病毒
• TaqMan探针
• 荧光定量RT-PCR

根据猪轮状病毒VP6基因序列保守区设计特异性探针和引物，建立一种特异、灵敏、通用、高效检测PoRV的实时荧光定量RT-PCR检测方法。扩增目的片段为173 bp，以构建的重组质粒pMD19-T-VP6为模板进行反应程序的优化。结果显示，该方法的标准曲线为y=－3.113 9x+39.298，R2=0.993 7，E=109.5%；用该方法检测猪常发传染病病原时结果均为阴性；对标准品质粒的最低检测限为1.32×100 copies/μL；批内、批间变异系数分别小于0.600%、1.300%，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。利用该方法检测114份临床腹泻病料，阳性检出率(39/114)优于常规RT-PCR(22/114)，39份阳性样品经测序鉴定均为PoRV，扩增VP7基因后成功构建22份阳性质粒，测序结果显示共检出6种G型PoRV，检出率依次为G3/9.09%、G4/22.72%、G5/18.18%、G9/31.82%、G11/4.54%、G26/9.09%。上述结果表明，本试验建立了一种快捷、准确检出PoRV的TaqMan探针通用型实时荧光定量RT-PCR方法，对该病的诊断、病原监测、流行病学调查具有重要意义。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学