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摘要
[目的]在大肠杆菌中构建基于嗜热Ⅱ型内含子的高效Thermotargetron基因打靶系统，并验证其温度敏感性及打靶效率，为嗜热Ⅱ型内含子功能分析建立快速遗传检测平台。[方法]首先，以大肠杆菌lacZ基因为靶基因，根据嗜热Ⅱ型内含子碱基识别规律设计基因打靶引物，构建IPTG诱导型Thermotargetron打靶载体。然后，利用蓝白斑筛选及菌落PCR方法检测其打靶效率，并通过优化温度、IPTG浓度及诱导时间，确定Thermotargetron在大肠杆菌中的最佳打靶条件。[结果]在大肠杆菌正常生理条件下，Thermotargetron不具有基因打靶功能，而在45℃及以上条件下可获得较好的打靶效率，且在48℃、1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时在lacZ-369a、lacZ-60a、lacZ-515a三个位点的打靶效率分别达到98.05%±1.67%、91.76%±7.08%和69.77%±5.86%。[结论]在短暂耐高温的大肠杆菌中建立了IPTG诱导的Thermotargetron基因打靶系统，该系统在任意选择的3个靶位点的打靶效率平均为86.5%±12.1%,为嗜热Ⅱ型内含子的功能机制研究奠定了平台基础。
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单位贵州医科大学; 基础医学院
