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摘要
胰蛋白酶（trypsin）是贴壁细胞传代过程中必不可少的工具酶.研究比较了猪源胰蛋白酶、两种牛源胰蛋白酶和全合成胰蛋白酶TrypLE消化Vero细胞和KMB17细胞的效果，评价在疫苗生产中培养细胞的最佳消化工艺，以及在向伊斯兰国家及人群提供生物制品过程中存在的Halal（清真）验证中关于猪源胰蛋白酶的替代问题.首先，利用配置好的活力均为1 400～1 500 U/mL的猪源胰酶、牛源胰酶-1、牛源胰酶-2和全合成胰酶TrypLE试剂分别在37℃环境中消化细胞，采用荧光计数仪进行计数及活率检测.然后，将得到的细胞悬液稀释至2×105 mL-1，接种至6孔板和96孔板中，在培养的不同时间绘制细胞生长曲线和检测细胞增殖及毒性.在筛选到可替代消化酶之后，进行10次重复实验.结果显示，Vero细胞消化实验中,猪源胰酶的消化能力相对其他胰酶较好，有显著差异，其中牛源胰酶-2消化细胞后对细胞增殖和毒性影响影响最大. KMB-17细胞消化实验中，4种消化酶的消化能力均无显著差异，消化时间存在显著差异（P<0.05）,4种消化酶在48 h之后对KMB-17细胞增殖和毒性影响有明显差异.猪源胰酶、牛源胰酶-1和TrypLE消化Vero细胞后变异系数（CV）分别为1.08%、1.12%、1.22%；猪源胰酶和牛源胰酶-2消化KMB-17细胞后CV分别为1.15%、1.04%.为满足全球伊斯兰国家及人群对疫苗及生物制品使用的需求，可使用牛源胰酶-1和TrypLE替代猪源胰酶消化Vero细胞，消化KMB-17可使用牛源胰酶-2替代猪源胰酶.
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