摘要
目的探讨川芎嗪对H2O2诱导的大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)氧化损伤的抑制作用及其机制。方法在DMEM培养基中培养RGC-5细胞。将细胞分成5组:正常对照组:不做任何处理;阴性对照组:用20 g·L-1川芎嗪孵育24 h;氧化损伤组:用100μmol·L-1的H2O2孵育24 h;川芎嗪低浓度组:用20 g·L-1川芎嗪孵育24 h后加入100μmol·L-1的H2O2孵育12 h;川芎嗪高浓度组:用40 g·L-1川芎嗪孵育24 h后加入100μmol·L-1的H2O2孵育12 h。通过MTT法测定细胞增殖情况,荧光标记法检测RGC-5细胞内活性氧含量,Hoechst-PI染色观察细胞凋亡情况,使用721D分光光度计测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果 MTT法测定结果显示,氧化损伤组RGC-5细胞活性明显下降(24.67%±2.90%),与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。与氧化损伤组比较,川芎嗪低、高浓度组RGC-5细胞活性分别提高到51.33%±4.35%和60.00%±3.65%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。荧光标记法显示,氧化损伤组DCF荧光信号明显增强,不同浓度川芎嗪干预后,荧光信号强度逐渐减弱。Hoechst-PI染色显示,氧化损伤组凋亡细胞数增多,甚至出现红染的坏死细胞,细胞凋亡率为66. 00%±2. 98%;川芎嗪干预后,凋亡及坏死细胞逐渐减少,川芎嗪低、高浓度组细胞凋亡率分别为52. 33%±4. 11%和46. 04%±3. 52%,两组细胞凋亡率与氧化损伤组比较差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。与阴性对照组比较,氧化损伤组RGC-5细胞内SOD、GSH-PX含量明显下降,MDA含量升高,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。与氧化损伤组比较,川芎嗪高浓度组SOD、GSH-PX含量升高,MDA含量下降,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。与氧化损伤组比较,川芎嗪低浓度组SOD与MDA含量变化不大(均为P> 0. 05),GSH-PX含量升高(P <0. 05)。结论川芎嗪通过改变RGC-5细胞内抗氧化酶表达发挥对氧化损伤的RGC的保护作用。
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单位哈尔滨医科大学附属第一医院