重组人α-半乳糖苷酶A在CHO细胞中的表达及鉴定

作者：让文亮; 檀英霞; 王颖丽; 高红伟; 李素波; 季守平

来源：军事医学, 2011, (01): 54-57.

• 人&alpha
• -半乳糖苷酶
• 法布莱病
• CHO细胞

目的构建重组人α-半乳糖苷酶A(GLA)真核表达载体,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达重组的人GLA。方法利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人GLA cDNA,并构建到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A中。将重组质粒转染CHO细胞并用G418筛选。用丁酸钠诱导G418抗性细胞,检测培养上清中的GLA活性,筛选高表达GLA的细胞株。采用HisTrapTMFF纯化培养上清中的GLA蛋白并利用Western印迹进行鉴定。结果成功构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达,得到高表达量的单克隆(蛋白比活为1935 U/mg)。纯化后的培养上清在50×103(Mr)附近出现单一条带,通过Western印迹确定为GLA蛋白。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,获得了具有生物活性的重组人GLA,为临床上治疗法布莱病奠定了一定基础。