犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：孙文超; 解长占; 赵冠宇; 曹亮; 郑敏; 曹慧慧; 张红云; 韦显凯; 韩继成; 温树波; 肖朋朋; 靖杰; 张萍; 鲁会军; 金宁一

来源：动物医学进展, 2017, 38(05): 6-10.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2017.05.002

• 犬圆环病毒
• SYBR GreenⅠ
• 实时荧光定量PCR

犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明,所建立的方法 Ct值与标准品在4.67×109 copies/μL4.67×103 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445。该方法检测灵敏度为4.67×101copies/μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50%(4/32)。

• 单位
  军事医学科学院军事兽医研究所; 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心; 玉林市动物疫病预防控制中心; 动物科技学院; 广西大学