桉蝙蛾幼虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选

作者：陈晓; 邱峙嵩; 苏小燕; 许原; 曹丽沙; 杨振德; **^*

来源：环境昆虫学报, 2023, 45(04): 1016-1026.

• 桉蝙蛾
• 幼虫
• 龄期
• 体节
• 内参基因
• RT-qPCR

本研究通过筛选桉蝙蛾Endoclita signifer Walker幼虫不同龄期与不同体节中稳定表达的内参基因，为桉蝙蛾基因表达研究提供参考。通过实时荧光定量PCR技术测定5个候选内参基因(ACTIN、GAPDH、TUB、RIB、EF)在桉蝙蛾幼虫不同龄期(3龄、5龄、9龄、12龄)与不同体节(头部、胸部、腹部)及全样品(由所有样品组成)处理中的表达量，后利用GeNorm、NormFinder、BestKeeper对5个候选基因的稳定性进行评估，最后由RefFinder综合分析结果，选出最佳的内参基因。基于4种分析方法的评估可知，桉蝙蛾5龄和9龄幼虫的不同体节、不同龄期幼虫的头部和胸部中内参基因的最佳数目为2,而3龄和12龄幼虫的不同体节、不同龄期幼虫的腹部及全样本中内参基因的最佳数目为3。3龄、5龄、9龄和12龄幼虫的不同体节中可分别选择ACTIN+RIB+GAPDH、EF+RIB、GAPDH+EF和ACTIN+RIB+GAPDH作为最稳定的内参基因组合；EF+RIB、RIB+GAPDH和EF+GAPDH+ACTIN可分别作为不同龄期幼虫头部、胸部和腹部的最佳内参基因组合；综合考虑桉蝙蛾幼虫不同龄期与不同体节的影响时，可选择RIB、ACTIN和GAPDH作为内参基因。

• 单位
  广西大学