肿瘤恶病质肌管萎缩细胞模型构建及六君子汤对其改善机制研究

作者：郝羚伦; 张艳; 彭梦薇; 桑亚洲; 陈玉龙; 刘燕; 吴耀松^*

来源：时珍国医国药, 2023, 34(10): 2538-2541.

• 肿瘤恶病质
• 肌管萎缩
• 模型构建
• 六君子汤

目的 建立肿瘤恶病质肌管萎缩细胞模型，探讨六君子汤在体外对该模型的改善作用，为阐明六君子汤抗肿瘤恶病质肌肉萎缩的分子机制提供依据。方法 诱导成肌细胞C2C12分化，倒置显微镜观察分化后肌管长度；小鼠肺癌细胞(Lewis细胞)与C2C12细胞共培养，免疫荧光法检测C2C12细胞中肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MyHC)的荧光表达；MTT比色法检测六君子汤、叉头转录因子-1(Forkhead Box O1,FoxO1)抑制剂对两种细胞增殖影响；将共培养的C2C12细胞与Lewis细胞分为空白组、模型组、六君子汤组、抑制剂组(FoxO1抑制剂)、联合用药组(六君子汤联合FoxO1抑制剂),酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent Assay, ELISA)检测各组上清转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量；倒置显微镜观测各组C2C12细胞肌管变化；蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测各组C2C12细胞MyHC蛋白表达；透射电子显微镜观察各组C2C12细胞自噬体数量。结果 实验发现，C2C12细胞于分化48h肌管横径最长；与空白组比，模型组C2C12细胞MyHC的荧光表达明显降低(P<0.05),药物浓度以六君子汤100g/mL、FoxO1抑制剂1μmol/L为宜；与空白组比，模型组上清TGF-β1含量显著上升(P<0.05),C2C12细胞肌管长度减少(P<0.05),MyHC蛋白表达降低(P<0.05),自噬体数量增多(P<0.05);与模型组比，六君子汤组、抑制剂组、联合用药组TGF-β1含量下降(P<0.05),C2C12细胞肌管长度增加(P<0.05),MyHC蛋白表达增高(P<0.05),自噬体数量减少(P<0.05);与六君子汤组比，抑制剂组TGF-β1含量升高(P<0.05)。结论 诱导分化的成肌细胞C2C12与肺癌细胞Lewis共培养可构建肿瘤恶病质肌管萎缩模型，健脾和胃法的代表方六君子汤可以显著降低肌管萎缩模型上清TGF-β1含量、提高MyHC蛋白表达、减少自噬体数量，改善因肿瘤细胞环境下引起的肌管萎缩。

• 单位
  河南中医药大学; 天津中医药大学; 华中科技大学