基于流式细胞术的淋巴细胞亚群分类试验条件比较

作者：姜华; 文海若; 刘丽; 颜玉静; 霍艳^*

来源：中国医药生物技术, 2019, 14(05): 400-405.

• 流式细胞术
• 抗体
• 淋巴细胞亚群分类
• 食蟹猴
• 多聚甲醛

目的比较不同抗体稀释度和多聚甲醛浓度对流式细胞术测定淋巴细胞亚群分类结果的影响。方法取猴抗凝全血经浓度为1%或4%的多聚甲醛固定后连续4 d上机测定淋巴细胞荧光强度及CD3+、CD4+、CD8+、CD20+百分率及CD4+/CD8+比值。取猴抗凝全血50μl分别与1、3、5和10μlCD8+-FITC、CD4+-PE、CD3+-PerCP抗体混合后连续7d上机测定CD4+和CD8+荧光强度及CD4+与CD8+百分率和CD4+/CD8+比值。结果经1%多聚甲醛固定至第4天检测雄性动物CD4+、CD8+、CD3-CD20+百分率和雌性动物CD8+百分率与样本制备当天相比存在显著性差异(P<0.05,P<0.01),且存在时间依赖性。样本保存至第4天时以1%多聚甲醛保存的样本CD4+、CD8+、CD3-CD20+百分率与4%多聚甲醛保存的样本相比亦存在显著性降低(P <0.05,P <0.01,P <0.001)。50μl抗凝全血中添加1μl抗体时,自制备后第4天起CD4+平均荧光强度即显著降低(P<0.01)。所有样本至第4天起,CD4+及CD8+平均荧光强度显著性衰减(P <0.01)。结论不同多聚甲醛使用浓度、抗体用量及保存时间均对样本的状态和试验结果产生一定影响。如流式样本当天无法测定,样本可于4%浓度的多聚甲醛中稳定保存至制备后第4天检测;在50μl全血中应添加至少3μl抗体用于检测,以保证流式细胞仪对淋巴细胞表型识别的灵敏度,检测应于样本制备后3天内完成。

• 单位
  中国食品药品检定研究院