甲壳素亲和层析在人g2型溶菌酶制备中的应用

作者：黄鹏; 李文姝; 谢君; 鲍建瑛; 曹晓娥; 徐一新

来源：免疫学杂志, 2015, 31(05): 430-434.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20150092

• 人g2型溶菌酶
• 甲壳素
• 毕赤酵母
• 纯化

目的制备甲壳素亲和纯化介质,设计有效的纯化技术路线,对毕赤酵母表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,HLys G2)重组蛋白进行纯化。方法研究碱化、稀酸处理、碱化时间、碱浓度等各种因素对甲壳素介质性能的影响;对重组毕赤酵母进行甲醇诱导表达,依次采用亲和层析、阴离子交换层析、透析等方法从发酵液上清中纯化HLys G2,对最终纯化产物的纯度使用HPLC进行测定,杀菌活性使用双层琼脂平板扩散法进行测定。结果经处理后,在常压下甲壳素亲和介质洗脱速度可达4.5 ml/(min·cm2),对HLys G2吸附容量为1.8 mg/ml,总活性的收率为76.5%,得到的HLys G2纯度>99.0%,对溶壁微球菌具有杀灭活性。结论制备的甲壳素亲和介质具有良好性能,以甲壳素亲和层析为中心的纯化方法可有效纯化HLys G2,为规模化制备HLys G2奠定了基础。

• 单位
  复旦大学; 上海纽约大学; 遗传工程国家重点实验室