重组人血管内皮生长因子165腺病毒载体的构建与鉴定

作者：何春耒; 刘午阳; 姬广林; 王茂源; 肖文德; 吴东保; 何澄; 叶勇军; 莫建文; 高辉

来源：中华临床医师杂志(电子版), 2012, 6(02): 338-341.

• 血管内皮生长因子
• 转染
• 腺病毒科
• 组织工程

目的探讨构建携带人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的重组腺病毒载体,为进一步的基因转染构建组织工程骨的血管化提供实验基础。方法采用RT-PCR扩增的方法获得人源性的hVEGF165,并克隆入穿梭质粒pAdTrack CMV。构建的质粒pAdTrack CMV-VEGF165经酶切及测序鉴定正确后,通过pAdeasy1质粒的介导与腺病毒包装质粒pAdTrack CMV-VEGF165共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后获得携带人VEGF的重组腺病毒pAdTrack CMV-VEGF165。应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,测定病毒滴度。结果 PCR鉴定证实重组腺病毒含有人VEGF,病毒滴度为0.5×1011pfu/ml。结论成功构建的携带人VEGF的重组腺病毒载体能在HEK293细胞内扩增获得足够高的病毒滴度,为基因治疗构建组织工程骨血管化的研究奠定基础。

• 单位
  赣南医学院第一附属医院