过表达脂肪非典型钙黏蛋白4对结直肠癌化疗耐药的影响

作者：杨少宾; 王昱良; 李俊娜; 王朝杰

来源：西北药学杂志, 2022, 37(04): 76-81.

• 脂肪非典型钙黏蛋白4(FAT4)
• 结直肠癌
• 化疗耐药

目的 探讨过表达脂肪非典型钙黏蛋白4(fat atypical cadherin 4,FAT4)对结直肠癌化疗耐药的影响。方法 取正常人类肠黏膜上皮细胞系FHC、人结直肠癌HCT116细胞进行培养，用实时荧光定量(real-time fluorescence quantitative analysis, RT-PCR)检测FAT4 mRNA的表达水平；过表达人结直肠癌HCT116细胞中的FAT4,细胞转染48 h后，用RT-PCR检测HCT116细胞中FAT4 mRNA的表达水平；用蛋白质印迹法检测FAT4蛋白的相对表达量；用CCK-8法检测FAT4过表达对人结直肠癌HCT116细胞增殖活性的影响，计算药物半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)、化疗耐药倍数(resistance fold, RF);用流式细胞仪检测细胞凋亡率；用免疫共沉淀(co-immuoprecipiated, Co-IP)检测FAT4与p53、鼠双微粒体基因2(murine double minute2,MDM2)蛋白的相互关系；用蛋白质印迹法检测p53、磷酸化p53(phosphorylate-p53,p-p53)和MDM2蛋白的相对表达量。结果 人结直肠癌HCT116细胞中FAT4 mRNA的相对表达量为(0.36±0.12),正常人类肠黏膜上皮细胞中FAT4 mRNA的相对表达量为(1.02±0.35)(P<0.05);FAT4在结直肠癌HCT116细胞中呈低表达；对照组转染效率为89.58%,实验组为90.05%;各组细胞的增殖活性均随奥沙利铂质量浓度的增加而降低(P<0.05);与空白组、对照组比较，实验组FAT4 mRNA的相对表达量、FAT4蛋白的相对表达量升高，IC50值降低，细胞凋亡率升高(P<0.05);空白组、对照组和实验组RF分别为5.65、5.75和2.18倍；Co-IP实验结果显示，FAT4与p53、MDM2均存在特异的相互作用；与空白组、对照组比较，实验组p-p53蛋白的相对表达量升高，MDM2蛋白的相对表达量降低(P<0.05)。结论 FAT4过表达可抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖，促进细胞的凋亡，降低化疗耐药性，该作用可能通过调节MDM2-p53通路实现。

• 单位
  河南省人民医院; 黄河三门峡医院