miR-26对TGF-β2诱导的人Tenon氏囊成纤维细胞迁移、细胞外基质蛋白表达的调控作用及其机制

作者：李燕; 孟凯; 杜允宏; 陈斐; 刘文静; 鲍慧婧^*

来源：山东医药, 2022, 62(35): 34-39.

• miR-26
• 人Tenon氏囊成纤维细胞
• 细胞迁移
• 细胞外基质
• CTGF基因
• 转化生长因子β2
• 青光眼

目的 观察miR-26对转化生长因子β2(TGF-β2)诱导后人Tenon氏囊成纤维细胞(HTFs)的细胞迁移及细胞外基质(ECM)蛋白表达的调控作用，并探讨其可能的作用机制。方法 切取青光眼手术患者的结膜囊组织，以组织贴壁法体外培养HTFs。取传至第3～5代的HTFs，随机分为空白组(不予转染)、TGF-β2组(不予转染)、TGF-β2+miR-26 mimics组(转染miR-26类似物)、TGF-β2+mimics NC组(转染miR-26类似物阴性对照物)，TGF-β2+miR-26 inhibitors组(转染miR-26抑制物)，TGF-β2+inhibitors NC组(转染miR-26抑制物阴性对照物)，转染24 h后除空白组外均加入TGF-β25μg/L刺激48 h。采用划痕实验检测细胞迁移率，Western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、CTGF(荧光素酶报告基因实验证实miR-26和CTGF存在靶向关系)蛋白，实时荧光定量PCR法检测CTGF mRNA。将对数生长期的HTFs分为空白转染组(不予转染)、TGF-β2+miR-26 inhibitors组(转染miR-26 inhibitors)、TGF-β2+miR-26 inhibitors+si-NC组(转染miR-26 inhibitors+阴性对照siRNA)、TGF-β2+miR-26 inhibitors+si-CTGF组(转染miR-26 inhibitors+CTGF-siRNA)，转染处理24 h后均加入TGF-β25μg/L刺激48 h，比较四组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达。结果 六组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达：空白组、TGF-β2+miR-26 mimics组<TGF-β2组、TGF-β2+mimics NC组、TGF-β2+inhibitors NC组<TGF-β2+miR-26 inhibitors组(P均<0.05)。六组CTGF mRNA相对表达量：空白组<TGF-β2组、TGF-β2+mimics NC组、TGF-β2+miR-26 mimics组、TGF-β2+inhibitors NC组、TGF-β2+miR-26 inhibitors组(P均<0.05)。六组CTGF蛋白相对表达量：空白组、TGF-β2+miR-26 mimics组<TGF-β2组、TGF-β2+mimics NC组、TGF-β2+inhibitors NC组<TGF-β2+miR-26 inhibitors组(P均<0.05)。四组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达：TGF-β2+miR-26 inhibitors+si-CTGF组<空白转染组<TGF-β2+miR-26 inhibitors组、TGF-β2+miR-26 inhibitors+si-NC组(P均<0.05)。结论 miR-26可以抑制TGF-β2诱导后HFTs的细胞迁移及ECM蛋白合成，该作用可能是通过转录后水平靶向CTGF来实现的。

• 单位
  泰安市中心医院; 青岛大学