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摘要
以Ras同源基因家族成员C（Ras homolog gene family member C, RhoC）为靶点探讨栓菌酸（trametenolic acid, TA）对人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭的影响及机制，为栓菌酸的利用提供依据。采用MTT法检测TA对HepG2.2.15细胞增殖的影响；划痕实验、Transwell实验检测TA对细胞迁移、侵袭的影响；pull down实验检测TA对Ras相似物GTP酶（Ras homologue GTPases, Rho GTPases）活性的影响；Western blot实验检测TA对RhoC从胞质到胞膜转运及对RhoC/Rho相关激酶1（Rho-associated kinase 1, ROCK1）/肌球蛋白轻链（myosin light chain, MLC）/基质金属蛋白酶2（matrix metalloprotease 2, MMP2）/基质金属蛋白酶9（matrix metalloprotease 9,MMP9）通路相关蛋白表达的影响；采用瞬时质粒转染过表达pcDNA3.1-RhoC,激光共聚焦检测细胞骨架中F-actin的变化，并检测细胞迁移侵袭及RhoC/ROCK1/MLC/MMP2/MMP9通路相关蛋白表达的变化，以及RhoC GTP酶活性；建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型，以索拉菲尼为阳性对照(Sora 20 mg·kg-1),测量TA低、中、高剂量组(40、80、120 mg·kg-1)瘤体积和质量，瘤组织通过Western blot检测相关蛋白的表达。结果显示，TA呈浓度依赖性抑制HepG2.2.15细胞增殖，24、48 h的IC50分别为66.65、23.09μmol·L-1。裸鼠肿瘤质量、肿瘤体积均显著降低，索拉菲尼，TA低、中、高剂量组的抑瘤率分别为62.23%、26.48%、55.45%、62.36%。TA能显著降低HepG2.2.15细胞迁移侵袭数，且呈浓度依赖性抑制RhoC蛋白的表达及RhoC GTP酶活性，使膜组分RhoC显著下调，减少膜结合RhoC GTP酶的量。体内外实验证实，TA可显著抑制RhoC下游ROCK1、MLC、p-MLC、MMP2、MMP9蛋白表达。HepG2.2.15细胞转染pcDNA3.1-RhoC过表达RhoC后，TA能有效抑制过表达后RhoC、ROCK1、MLC、p-MLC、MMP2、MMP9蛋白的表达水平，及RhoC GTP酶的活性，与过表达前相对抑制水平相似。综上所述，TA可抑制人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭，其机制可能是通过靶向抑制RhoC GTP酶的活性，下调RhoC表达，从而抑制RhoC/ROCK1/MLC/MMP2/MMP9信号通路。该研究为利用中药有效成分多靶点优势，开发以热休克蛋白90α（heat shock protein 90α,HSP90α）为靶点的自噬调节剂，达到阻滞肝癌细胞增殖，同时抑制肝癌细胞的侵袭和转移双重作用提供了新思路和方法。
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