交叉引物恒温扩增技术在副溶血性弧菌毒力基因检测中的应用

作者：吴晓芳; 纪蕾; 严伟; 黄世旺; 马学军

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2018, 32(01): 85-88.

• 副溶血性弧菌
• 交叉引物恒温扩增技术
• 毒力基因

目的建立一种快速检测副溶血性弧菌耐热直接溶血素(TDH)和不耐热溶血素(TLH)的CPA-核酸试纸条法。方法根据副溶血性弧菌的TDH和TLH毒力基因序列设计特异性引物和探针,通过对反应体系进行优化,确立最佳反应温度和时间,并将CPA方法与荧光定量PCR法进行比较与评价。结果本研究建立的CPA-核酸试纸条法最佳反应温度和时间为60℃40 min,对副溶血性弧菌的TDH和TLH毒力基因检测具有高度特异性,对副溶血性弧菌的TLH和TDH检出极限分别为1.8 cfu/ml和16.0 cfu/m,与荧光定量PCR法一致;而且具有较好的稳定性。464株菌株中检出副溶血性弧菌TLH和TDH基因阳性率分别为100%(464/464)和72.6%(337/464),其中,水产品中分离株TDH毒力基因阳性率为7.81%(10/128);临床标本分离株TDH毒力基因阳性率为97.32%(327/336)。结论该方法检测副溶血性弧菌TLH和TDH基因,具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点,可用于副溶血性弧菌的现场快速检测。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所