HMGA1对TGF-β1诱导HTR-8/SVneo细胞上皮间质转化的影响

作者：刘昕; 万俊; 肖笛鸣; 涂玲; 魏明^*

来源：河北医药, 2023, 45(05): 657-666.

• 高迁移率族蛋白A1
• HTR-8/SVneo:TGF-β1
• 上皮间质转化

目的 研究高迁移率蛋白A1(HMGA1)对HTR-8/SVneo细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)诱导所致上皮间质转化(EMT)过程中的作用。方法 将HMGA1的小分子干扰RNA(siRNA)转染进人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,将细胞分为空白对照组、阴性对照+lipofectamine 3000组、lipofectamine 3000组、阳性对照+lipofectamine 3000组、HMGA1 SiRNA-1+lipofectamine 3000组、HMG1 SiRNA-2+lipofectamine 3000组、HMG1 siRNA-3+lipofectamine 3000组，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法，检测各组的HMGA1基因和蛋白表达，筛选出沉默效率最佳的siRNA;TGF-β1诱导HTR-8/SVneo发生EMT,研究TGF-β1对EMT过程的影响；使用筛选后的siRNA与TGF-β1共同作用，检测HMGA1、N-cadherin、E-cadherin的表达情况；加入TGF-β1用于诱导细胞，探究PI3K/AKT和NF-κB通路相关蛋白的表达状况；利用PI3K/AKT和NF-κB通路抑制剂阻断通路，研究HMGA1在通路介导下EMT过程的作用机制。结果 HMGA1 siRNA-1组沉默效果最佳，可用于后续实验；与空白对照组相比，TGF-β1组E-cadherin蛋白表达水平降低，N-cadherin蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05);干扰HMGA1表达可以阻止TGF-β1诱导HTR-8/SVneo细胞发生EMT;TGF-β1诱导后，通路相关蛋白p-AKT、AKT、NF-κB表达量均增加，与空白对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05);加入通路抑制剂后，HMGA1的表达量主要受PI3K/AKT通路的影响，而NF-κB通路的抑制剂对HMGA1的影响较小。结论 HMGA1在TGF-β1诱导的HTR-8/SVneo细胞EMT过程中发挥着重要作用，而且TGF-β1主要通过PI3K/AKT通路调控HMGA1的表达，进而促进细胞发生EMT。

• 单位
  郑州大学第五附属医院